Пламен Пенев
преподава по Биология
в град Чирпан
Големина на текста:
Химикотехнологичен и металургичен университет
ПРОТОКОЛ № 4
по Биохимия
ТЕМА:
Количествени методи за определяне на белтъци
Изготвил: Проверил:
Дата:
1.Определяне на азотното съдържание ( метод на Келдал) нарича се още
азото-метричен метод.Протича през два етапа: минерализация и
дестилация.
- минерализация: под действието на H
2
SO
4
, в присъствие на подходящ
катализатор, при което присъстващият азот се отделя като амоняк п се
свързва със Н
2
4
под формата на амониев сулфат.
белтък + H
2
SO
4
-> (NH
4
)
2
4
+ CO
2
+ SO
2
+ H
2
O
Амонякът от амониевия сулфат може да бъде определен чрез дестилация,
при която под действие на силна основа (NaОН или КОН), той се
освобождаи и се улавя от определен обем на стандартен разтвор на H
2
SO
4
отново като (NH
4
)
2
4
.
Излишъкът от непрореагиралата H
2
SO
4
се определя титриметрично с
помощта на стандартен разтвор на NаОН или КОН.
(NH
4
)
2
4
+ 2 NaOH = 2NH
4
OH + 2 Na
2
4
2NH
4
OH + H
2
SO
4
= (NH
4
)
2
4
+ 2H
2
O
излишък H
2
SO
4
+2NaOH = Na
2
4
+ 2H
2
O
2 Биуретов метод- названието си този метод е получил от производното на
карбамида (
2
N-CO-NH-CO-NH
2
) което се получава при нагряване на сух
карбамид, в резултата на отделяна на амоняк. В алкална среда в
присъствие на Cu2+ , биуретовия разтвор дава розововиолетово
оцветяване, което се дължи на получилия се медно- биуретов комплекс.
За дапротече биуретова реакция са необходими най-малко две амидни
връзки.
Методъм има две разноидности: макрометод: при определяне на белтък от
2-10 mg. в изследваната проба и микрометод: при съдържание от 0.1-
2.0mg.
3.Метод на Лаури: основава се на получаването на синьо оцветен продукт
както и при биуретовия метод и на реакцията на
фосфомолибдоволфрамовата до хетерополимолибденово синьо от
присъстващите в белтъците ароматни аминокиселини. Този метод
позволява определянето на белтъци в диапазон 0.005-0.1mg.
4. Метод на Брадфорд: основава се на свързването на багрилото кумасси
синьо с белтъците. Катионната форна на багрилото, която преобладава в
кисела среда на р-ра на реактива, абсорбира при ?
max
= 470 nm , докато
анионната форма се свързва с белтъците при ?
max
= 595 nm. Toва
позволява, чрез измерване на абсорбцията при ?
max
= 595 nm да бъде
определено количеството на свързаното с белтъка багрило. Багрилото
проявява най-голям афинитет ма свързване с аргиниовите остатъци в
белтъците. Главен недостатък на метода е варирането на резултата при
анализа.
5. Спектрофотометричен метод (OD
280
/ OD
260
) : количесвеното съдържание
на белтъчното съдържание по този метод се основава на пръсъстващите в
белтъците ароматни аминокиселини, което обуславя поглъщането на
светлина от белтъчните разтвори с ?
max
при 280nm.
Тъй като съдържанието на ароматни аминокиселини в различните белтъци
е различно, то стойността на OD
280
са различни. Условно се приема, че при
стийност за OD
280
= 0.1 средната белтъчна концентрация в р-ра е 1mg/ml.
Тъй като нуклеотидите и нуклеиновоте киселини адсорбират светлина и
при ?
max
= 260 , за да е изчислено коректно съдържанието на белтъци
може да се използва или номограма или по следната формула:
белтъчно съдържание(mg/ml)= 1.5. А
280
– 0.75 А
260
, чрез което се постига
относително коригиране на съдържанието на нуклеинови киселини.
2) Ход на опита:
- вземаме определено количство карбамид, което нагряваме докато
достигне температура на кипене и отново се втвърди.
Приготвяме 10% р-р NaOH и 5% CuSO
4
. След като се охлади нагретия
карбамид в епруветката имаме вече биурет. Прибавяме 2 капки от разтвора
на CuSO
4
и 1ml NaOH. Получаваме очакваното розововиолетово
оцветяване.
- имаме изходен белтък с концентрация 10mg/ml .
В 6 епруветки поставяме:
епруветка 1: 0.2 ml от белтъка, 0.8 ml вода, 4 ml биурет;
епруветка 2: 0.4 ml от белтъка, 0.6 ml вода, 4 ml биурет;
епруветка 3: 0.6 ml от белтъка, 0.4 ml вода, 4 ml биурет;
епруветка 4: 0.8 ml от белтъка, 0.2 ml вода, 4 ml биурет;
епруватка 5 :4 ml биурет
епруветка 6: 4 ml биурет и 1 ml вода.

Това е само предварителен преглед

За да разгледате всички страници от този документ натиснете тук.
Последно свалили материала:
ДАТА ИНФОРМАЦИЯ ЗА ПОТРЕБИТЕЛЯ
14 яну 2019 в 13:40 ученичка на 24 години
 
 
Онлайн тестове по Биохимия
Тест по Биохимия за студенти от 1-ви курс
тематичен тест по Биохимия за Студенти от 1 курс
Тестът е предназначен за студенти, които учат в Медицински университет. Съдържа 19 въпроса, всеки от които има само един верен отговор.
(Труден)
19
26
2
2 мин
04.09.2018
Метаболитни процеси, протичащи в клетката - тест
състезателен тест по Биохимия за Ученици от 12 клас
Тестът е предназначен за ученици от 9 до 12 клас, които имат знания по биохимия и са надградили учебно ниво от първо равнище. Тестът е на ниво, така че всеки може да опита да го реши за да задълбочи знанията си в тази област на биохимията. Въпросите са с един верен отговор.
(Труден)
12
137
1
1 мин
27.06.2012
» виж всички онлайн тестове по биохимия

Количествени методи за определяне на белтъци

Материал № 567684, от 16 ное 2010
Свален: 62 пъти
Прегледан: 224 пъти
Предмет: Биохимия, Биология
Тип: Протокол
Брой страници: 4
Брой думи: 501
Брой символи: 3,014

Потърси помощ за своята домашна:

Имаш домашна за "Количествени методи за определяне на белтъци"?
Намери бързо решение, с помощтта на потребители на Pomagalo.com:

Намери частен учител

Пламен Пенев
преподава по Биология и Химия
в град Чирпан
с опит от  4 години
53

Недялко Симеонов
преподава по Биохимия
в град Силистра
с опит от  12 години
77

виж още преподаватели...
Последно видяха материала